04-002-1A BI ES級別胎牛血清|*

產(chǎn)品名稱：ES級別胎牛血清

英文名稱：Certified Fetal Bovine Serum, Qualified for Human Embryonic Stem Cells

貨號：04-002-1A

品牌：BI

規(guī)格：500ML

等級：優(yōu)等

庫存狀態(tài)：現(xiàn)貨

Product Overview

Embryonic Stem (ES) Cells are pluripotent cells derived from the inner cell mass of the blastocyst. The stem cells can be maintained in vitro for extended periods without loss of their capacity to differentiate to all cell lineages when reimplanted back into a blastocyst. ES cells may differentiate in vitro to a variety of cell types including neuronal, muscle, endothelial and hematopoietic progenitors. General culture conditions are well established and usually require ES cells to be grown on an inactive feeder cell layer or with basement membrane components (Matrigel, Fibronectin, Laminin). When growing ES cells, one of the most important parameters is the maintenance of the cells in the undifferentiated state. Pre-screening of the serum is essential before using it for the culture of ES cells. Various lots of sera are screened for the growth of Human ES cells using MEF's as a feeder layer.

The following parameters are measured for the screening:

Human ES cells colony morphology

Plating efficiency

Differentiation rate: analysis of Human ES cells surface marker expressed on the undifferentiated cells membrane (FACS analysis).

The results are used as an indication of the quality of sera for the growth and maintenance of undifferentiated stem cells.

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1、 如何儲存和解凍血清才不會使產(chǎn)品質(zhì)量受損？
將血清從冷凍箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室溫下使之全融。但必須注意的是，融解過程中必須規(guī)則地搖晃均勻。長時間儲存在2－8℃時，血清中的各種蛋白和脂蛋白（如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等）可能聚集而形成沉淀或可見的混濁。因此，推薦在-20℃以下儲存血清，并避免反復(fù)凍融。我們建議血清應(yīng)保存在-2O℃。若存放于4℃時，請勿超過一個月。若一次無法用完一瓶，建議無菌分裝血清至恰當?shù)臏缇萜鲀?nèi)，再放回冷凍。

2、血清中包含絮狀沉淀，它們是什么，怎么處理？
沉淀包含纖維蛋白和脂蛋白。這是正常特性，不會影響產(chǎn)品性質(zhì)。要除去沉淀，離心血清（400g，1-2分鐘）或者簡單的讓其沉淀在瓶子底部，將血清小心的轉(zhuǎn)移到另一個無菌瓶里（一般不建議采用過濾的方法除去沉淀，因為沉淀會堵塞濾膜而無法過濾）。大多情況輕輕搖動沉淀并加熱至37℃就會再溶解。所以，使用產(chǎn)品時要搖動并加熱血清至37℃，沉淀會自然消失。

4、 如何避免血清中產(chǎn)生沉淀？
按如下操作可避免沉淀的產(chǎn)生：
（1）解凍血清時，請隨時將之搖晃均勻，使溫度及成分均一，減少沉淀的發(fā)生。
（2）血清分裝凍存時，須規(guī)則搖晃均勻（小心勿造成氣泡），使溫度與成分均一。
（3）勿直接由-20℃直接至37℃解凍，因溫度改變太大，容易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)而發(fā)生沉淀。
（4）勿將血清置于37℃太久，否則血清會變得渾濁，同時血清中許多較不穩(wěn)定的成份也會因此受到破壞，從而影響血清的品質(zhì)。
（5）血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以無須做此步驟。
（6）若必須做血清的熱滅活，請遵守56℃，30分鐘的原則，并且隨時搖晃均勻。溫度過高，時間過久或搖晃不均勻，都會造成沉淀物的增多。

5、 培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素后，可長期保存嗎？

一旦您在新鮮培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素時，您應(yīng)該在兩到三周內(nèi)使用它。因為一些抗生素和血清中的基本成分在解凍后就開始降解。

6、 為什么要熱滅活血清?

加熱可以滅活補體系統(tǒng)。激活的補體參與溶解細胞事件，刺激平滑肌收縮，細胞和血小板釋放組胺，激活淋巴細胞和巨噬細胞。在免疫學(xué)研究，培養(yǎng)ES細胞、平滑肌細胞時，推薦使用熱滅活血清。

7、 有必要做熱滅活嗎?

實驗顯示，經(jīng)過正確處理的熱滅活血清，對大多數(shù)的細胞而言是不需要的。經(jīng)此處理過的血清對細胞的生長只有微小的促進，或*沒有任何作用，甚至通常因為高溫處理影響了血清的質(zhì)量，而造成細胞生長速率的降低。而經(jīng)過熱處理的血清，沉淀物的形成會顯著的增多，這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察，像是“小黑點”，常常會讓研究者誤以為是血清遭受污染，而把血清放在37℃環(huán)境中，又會使此沉淀物更增多，使研究者誤認為是微生物的分裂擴增。若非必須，可以不需要做熱處理這一步。不但節(jié)省時間，更確保血清的質(zhì)量!

8、細胞培養(yǎng)中出現(xiàn)黑點是污染嗎？如何處理？

一旦您在細胞培養(yǎng)的過程中發(fā)現(xiàn)有黑點生成，首先，要肉眼觀察培養(yǎng)基是否混濁，然后，在鏡下觀察培養(yǎng)細胞生長的狀態(tài)，黑點是否游動。如果細胞被污染，微生物則會大量繁殖，培養(yǎng)基就會迅速變黃、變混濁。污染包括細菌污染、支原體污染等。如果在鏡下觀察細胞，生長狀態(tài)良好，與黑點出現(xiàn)前相比，沒有任何變化，那么，黑點的出現(xiàn)可能與以下幾種情況有關(guān)：（1）細胞生長過老，破碎的細胞殘骸；（2）血清質(zhì)量不好，反復(fù)凍融的結(jié)果；（3）配制培養(yǎng)基的pH值偏高，不宜細胞生長；（4）配制培養(yǎng)基的水質(zhì)、容器不合格。可應(yīng)用離心、過濾的方法去除這些黑點；（5）培養(yǎng)原代細胞中出現(xiàn)小黑點，可能是原代組織中的雜質(zhì)，多次傳代可以消除。

9、 細胞培養(yǎng)中如何防止黑點生成？
（1） 盡可能地減少血清凍融次數(shù)。
（2） 培養(yǎng)基無需37℃水浴。
（3） 培養(yǎng)基保持*PH值7.0- 7.2。
（4） 嚴格控制配制培養(yǎng)基的水質(zhì)，容器定期刷洗。
（5） 掌握細胞傳代的*時機，細胞切勿生長過老。

使用前處理：大部分血清在使用前必須滅活處理，即56℃30分鐘。滅活的目的是去除血清中的補體成分，避免補體對細胞產(chǎn)生毒性作用。血清經(jīng)過滅活也會損失一些對細胞有利的成分，如生長因子，因此也有人提出血清不經(jīng)滅活直接用于培養(yǎng)，這樣做的前提是確認血清中不含補體成分。對于一些品質(zhì)高的胎牛血清和新牛血清可以考慮不經(jīng)滅活直接用于細胞培養(yǎng)。

儲存條件：血清一般儲存于－20℃，同時應(yīng)避免反復(fù)凍融。購買大包裝的血清后，首先要滅活處理，然后分裝成小包裝，儲存于－20℃，使用前融化。融化時zui好現(xiàn)置于4℃。融化后的血清在4℃不宜長時間存放，應(yīng)盡快使用。

使用濃度：自從有了合成培養(yǎng)基，血清就是作為一種添加成分與合成培養(yǎng)基混合使用，使用濃度一般為5－20％，zui常用是10％。過多血清容易使培養(yǎng)中的細胞發(fā)生變化，特別是一些二倍體的無限細胞系，迅速生長之后容易發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化。

采購血清時，zui好先從供應(yīng)商處索取樣品進行試驗，選定一批后就要保留足夠使用6個月至1年的量，直至用另一批經(jīng)過預(yù)先試驗的樣品代替。

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